食品工业科技杂志

食品工业科技杂志2020年第23期

• 乙醇诱导改性对乳清分离蛋白结构及乳化特性的影响

  冯旸旸, 王浩, 于栋, 徐敬欣, 孔保华, 刘骞

  本实验以未经乙醇溶液处理的乳清分离蛋白(Whey protein isolate,WPI)作为对照组,研究不同浓度乙醇(10%、30%、50%和70%,v/v)处理对WPI结构特性和乳化特性的影响。结果表明,乙醇诱导改性会使WPI的二级结构和三级结构发生显著变化。当乙醇浓度低于50%时可以使蛋白结构展开,而乙醇浓度高于50%时会使WPI分子之间通过二硫键形成聚合物。另外,与对照组相比,乙醇改性能够赋予WPI更高的表面疏水性和更佳的乳化特性(包括乳化活性和乳化稳定性),且乙醇浓度为50%时改善效果最为显著(P<0.05)。上述研究结果表明,乙醇诱导改性是一种有效的改善WPI乳化特性的改性方法,从而为蛋白质的改性奠定了理论基础。

• 基于气相-离子迁移谱对竹燕窝菌汤风味成分的分析

  杨芳, 杨莉, 张振宇, 肖岚, 秦涛, 贾洪锋

  为探究竹燕窝菌汤风味物质的含量及变化规律,以筛选熬制竹燕窝菌汤的最佳熬制方式,以微波、电压力锅、电磁炉3种加热方式熬制的竹燕窝菌汤(分别标记为WB、DYL和DCL)作为试验对象,采用氨基酸自动分析仪和气相-离子迁移谱(GC-IMS)联用仪,根据相对气味活度值(ROAV)和主成分分析法(PCA)对竹燕窝菌汤的风味进行分析。结果表明,固形物溶出率、游离氨基酸总量最高的均为DYL,游离氨基酸中谷氨酸含量最高。GC-IMS二维图谱、指纹图谱均可得出三种样品挥发性有机物(VOCs)的明显差异,指纹图谱中B框主要存在于WB中,包括:1-辛醇、3-甲基丁酸二聚体等;D框主要存在于DCL中,包括:2-辛酮、壬醛等;F框主要存在于DYL中,包括:2-甲基丙醛、2-丙醇等。在2-甲基丙醛、2-丙醇含量方面,DYL与其余两种样品间存在显著性差异(P<0.05);已定性的VOCs中,以醛类和醇类化合物为主。ROAV法确定出三种样品的关键风味化合物种类相似,但贡献度差异较大。PCA分析显示,PC_161%与PC_230%之和为91%,PC_161%可将三种样品进行很好的区分。电压力锅熬制为竹燕窝菌汤的最佳熬制方式。基于GC-IMS检测技术,测定竹燕窝菌汤的VOCs,以对微波、电压力锅、电磁炉3种熬制工艺进行区分是可行的。

• 干燥方法对印度块菌(<i>Tuber indicum</i>)品质的影响

  马宁, 仲磊, 赵立艳, 郑惠华, 胡秋辉

  为了解不同干燥方法对印度块菌干后品质及微观结构的影响,本研究采用热风干燥、真空冷冻干燥方法对印度块菌进行处理,以感官品质(色泽、质构)、复水特性、营养成分(还原糖、总蛋白、维生素C、总黄酮)及微观结构为评价指标,评价干燥方法对印度块菌品质的影响,并利用低场核磁共振技术研究干燥处理期间水分的迁移率和分布。结果表明,与热风干燥比,真空冷冻干燥产品L*高,a*低,能够较好维持产品色泽,热风干燥产品褐变严重,且真空冷冻干燥产品硬度低,脆性高。真空冷冻干燥产品复水比及复水速率显著高于热风干燥产品(P<0.05),干燥10 min后,冷冻干燥复水比值为3.00,显著高于热风干燥(2.26)(P<0.05),冷冻干燥复水速率(0.30 min-1)显著高于热风干燥(0.22 min-1)(P<0.05)。与新鲜样品比,两种干燥产品中总蛋白含量无显著变化,维生素C、还原糖及总黄酮保留量显著降低(P<0.05);与热风干燥产品比,真空冷冻干燥产品维生素C、还原糖及总黄酮保留量显著高于热风干燥产品(P<0.05)。低场核磁共振分析表明,冷冻干燥组T23水分信号强度衰减速率高于热风干燥组,说明真空冷冻干燥效率更高。扫描电镜观察微观结构发现热风干燥产品细胞组织收缩、塌陷且结构很致密,真空冷冻干燥产品呈现多孔结构。综合分析,干燥对印度块菌干制品的营养及品质影响较大,真空冷冻干燥更适合印度块菌产品的干燥加工,本研究为提高印度块菌干制品加工品质提供理论依据。

• 韧化处理对山药粉理化性质及结构的影响

  张百汝, 贾淑玉, 李杰, 于滨, 崔波

  通过对山药粉进行韧化处理,研究水分含量和处理时间对山药粉溶解度和膨胀力、黏度特性、热力学性质、结晶及结构特性的影响。韧化处理后山药粉的溶解度和膨胀力均显著(P0.05)。X射线粉末衍射仪(X-ray Diffractometer,XRD)结果表明,韧化处理后的山药粉结晶型由C型变为C+V型,结晶度增加,其结构较原山药粉的更稳定。傅里叶变换红外光谱表明,韧化处理后吸收峰的位置没有改变,结构有序度升高。韧化处理提高了山药粉的结构稳定性,并使其理化特性得到较好的改善。

• 藻蓝蛋白-壳聚糖复合膜的制备及性能表征

  罗爱国, 赵琪, 马建华, 杨艳君, 胡变芳

  以壳聚糖为基材,将藻蓝蛋白添加到壳聚糖膜中制成复合膜,探讨藻蓝蛋白添加配比对复合膜的理化性质、机械性能、及抑菌性的影响。结果表明:随着藻蓝蛋白添加比例增加(0.5%~1.0%,w/v),复合膜的水蒸气透过性与抗拉强度减小,而不透明度、抑菌活性及断裂伸长率增加。当藻蓝蛋白添加比例为1.0%时,复合膜表面、内部结构更均一致密,具有最大的不透明度(3.927 Abs600·mm-1)、断裂伸长率(79.73%)和最低的水蒸气透过系数(1.273×10-10g·m-1·s-1·Pa-1)。1.0%复合膜对大肠杆菌的抑菌圈直径最大,为22.36 mm。该研究可为藻蓝蛋白-壳聚糖复合活性膜的应用提供理论依据。

• 超声波和TGase对重组草鱼肉形成过程中理化性质的影响

  孟粉, 秦求思, 董烨, 毛海萍, 戴志远

  本研究以草鱼为原料,采用四种处理方式:对照组(只添加NaCl)、实验组1(添加NaCl和谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase))、实验组2(添加NaCl且超声)、实验组3(添加NaCl和TGase且超声),对草鱼肉进行重组。通过测定其分子间作用力、巯基含量、浊度、溶解率等,分析重组过程中超声波和TGase对重组草鱼肉理化性质的影响。结果表明,在重组草鱼肉形成过程中,超声波和TGase对离子键、氢键、疏水相互作用、二硫键和非二硫键均有不同程度的影响,促进重组草鱼肉的形成;与此同时,在重组草鱼肉形成过程中,超声波和TGase可以加速肌原纤维蛋白巯基氧化形成二硫键,增强其表面疏水性,增加其浊度,降低重组草鱼肉蛋白质溶解率;由SDS-PAGE电泳图谱可知,在重组草鱼肉形成过程中,三个实验组在200 kDa附近的条带逐渐变淡,甚至消失,可知重组过程中超声波和TGase主要作用于肌原纤维蛋白重链。综合各试验指标结果,超声波和TGase均可促进草鱼肉蛋白质交联,且两者同时作用时交联度最高,对指导草鱼肉产业生产具有一定的参考价值。

• 山茱萸籽粕亚临界水降解动力学及多糖性质研究

  何坤明, 陈兰转, 孙光友, 谭旺桥, 白新鹏

  本实验以山茱萸籽粕为原料,进行山茱萸籽粕亚临界水降解研究,测定不同降解温度、降解时间下液态产物的还原糖含量,采用Saeman模型模拟分析,建立降解动力学方程,得到降解动力学参数,并对降解物进行理化性质的分析。结果表明,Saeman模型能较好反映山茱萸籽粕亚临界水降解的过程,初步降解的反应活化能Ea1为29.47 kJ/mol、还原糖降解活化能Ea2为22.21 kJ/mol、指前因子K10为101.49 min-1、K20为20.28 min-1,在降解温度160 ℃、降解时间20 min条件下,能得到产量较高的还原糖。单糖组成分析表明,山茱萸籽多糖主要由葡萄糖、木糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,其总糖含量高达78.82%;扫描电镜和红外光谱结构分析结果表明,多糖结构呈表面光滑,无规则颗粒状,粒径大小不一的球状结构物,为吡喃型糖苷环骨架;抗氧化活性分析结果表明,山茱萸籽多糖具有较好的自由基清除能力,在质量浓度为1.0 mg/mL时,对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率分别为85.61%、63.40%、76.20%。本试验结果为山茱萸籽多糖的进一步分离纯化和理化特性、形态结构的分析提供了参考。

• LF-NMR动态分析4种干燥方式下鱿鱼干的复水特性

  余铭, 梁钻好, 周伟光, 李轩, 陈海强, 王亚昊

  以鱿鱼为研究对象,采用自然晒干、热风干燥、热泵干燥、真空冷冻干燥4种干燥技术干制鱿鱼,结合鱿鱼干的肌纤维微观结构和复水率,通过低场核磁共振(LF-NMR)动态分析鱿鱼干复水过程的水分迁移和分布,探讨干燥方式对鱿鱼干复水的影响。结果表明,4种干燥方式中,真空冷冻干燥的鱿鱼干水分含量最低,氧化程度也最低(比其它3种处理的低1.5~6.7倍)。电镜扫描图显示鱿鱼干肌纤维内部有大量疏松多孔的蜂窝状结构,且真空冷冻干燥复水最快。复水过程,部分结合水向不易流动水迁移,不易流动水含量明显增加,且占比90%以上,自由水含量也有所提升。LF-NMR分析也表明真空冷冻干燥的鱿鱼干复水效果最好,复水后可截留更多的自由水。热泵干燥的鱿鱼干复水效果与自然干燥接近,热风干燥的复水率最差。干燥方式对干制品复水效果影响明显,真空冷冻干燥和热泵干燥技术有利于水产品干制。

• 破壁对灵芝孢子粉品质的影响

  江和栋, 李广焱, 牛仙, 万仁口, 陈小露, 邓泽元, 李红艳

  以灵芝孢子粉为原料,利用微波、超声对其进行破壁,以微波和超声的时间、功率、料液比为因素,灵芝孢子粉的多糖和三萜的含量为指标,得到最佳破壁工艺为料液比20∶1 (mL/g),微波功率280 W,微波时间90 s。以微波破壁所得到的灵芝孢子粉为原料,对比破壁前后的孢子粉粒度、松紧密度、比表面积、色度、休止角并用电镜观测形态;测定破壁前后孢子粉的总脂肪、总多糖、总三萜、灰分、蛋白质、多酚等营养成分含量,比较破壁前后孢子粉的品质。结果表明,破壁后灵芝孢子粉的感官状态与未破壁孢子粉差异明显:孢子粉的比表面积、松紧密度、色度均明显增加;粒度、流动性有所减小。经过破壁后的孢子粉中脂肪、多糖、三萜、灰分、蛋白质等营养物质的含量均不同程度地提高。实验证明,微波破壁处理有助于灵芝孢子粉中三萜、粗多糖、粗脂肪等功能性成分的溶出,大大增加了灵芝孢子粉有效成分的溶出。

• 构巢曲霉产植酸酶的酶学特性分析

  高兆建, 杨培玲, 杨芳, 宋玉林, 赵宜峰, 焦魏, 陈腾

  从构巢曲霉AnP-16菌株发酵液中纯化单一组分的耐热耐酸植酸酶,并对酶学特性进行分析,为其在食品工业中的应用提供理论依据。通过硫酸铵盐析、离子交换层析和疏水层析纯化植酸酶,SDS-PAGE电泳测定其分子量。结果表明,从该菌株发酵液中纯化到了单一组分的植酸酶,纯化倍数60.8倍、回收率41.6%,酶分子量约52 kDa。植酸酶最适作用温度和pH分别为55 ℃和pH4.0,在pH3.0~6.0范围酶活性较高,pH2.0~7.0下孵育3 h,仍能保持80%以上活性。植酸酶耐热性好,70 ℃孵育1 h仍能保持81%活性。Hg2+、Mn2+、Fe2+、Cu2+和Zn2+ 5 mmol/L浓度下对酶活性有明显抑制作用,但Ca2+和Mg2+在1和5 mmol/L浓度时均增强酶活性;有机溶剂甲醇和乙醇在2%浓度有激活作用;SDS抑制酶活性,但其它表面活性剂(Triton X-100和Tween 80)和有机溶剂(丙酮和异戊醇)对酶活性无明显影响。植酸酶有宽泛的底物特异性,但对植酸钠的催化活性最强,其Km值为0.576 mmol/L。基于植酸酶耐酸耐热及宽广的底物催化活性,其有望应用于粮油食品加工领域,提高食品的营养价值。

• 粗壮脉纹孢菌高密度培养基的优化及补料策略

  魏长浩, 曹余, 邹新华, 范亚苇, 李静, 李红艳, 邓泽元

  本研究以粗壮脉纹孢菌(Neurospora crassa)为实验菌株,采用单因素实验结合响应面法对粗壮脉纹孢菌的高密度培养基配方进行优化。以生物量为指标,得到最优培养基组成:蔗糖42 g/L、蛋白胨36 g/L、磷酸二氢钾2.6 g/L、硫酸锌0.038 g/L、硫酸镁0.1 g/L、硫酸锰0.03 g/L、氯化钾0.1 g/L,经验证实验发现,在最优培养基组成下菌体生物量最大可达11.295 g/L。并采用补料分批培养的方式扩大菌体生物量,进一步提高高密度培养的效果。结果表明,在最优培养基的基础上,分别于培养24、60、96 h进行补料,共补料3次,每次补加200 g/L的蔗糖溶液10 mL,可获得粗壮脉纹孢菌的最大生物量14.732 g/L,该结果为实现粗壮脉纹孢菌这一优良菌种的工业化应用提供了理论支持。

• 肉源乳酸菌抑菌特性分析

  张开屏, 马牧然, 曹凯慧, 马俊杰, 田建军

  为了筛选有抑菌活性的乳酸菌并分析其抑菌的物质基础,利用牛津杯琼脂扩散法,分析了19株从牧区风干肉制品中分离得到的肉源乳酸菌发酵上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力,同时从中分别选取对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制能力有显著差异的乳酸菌各3株,对其上清液中的抑菌物质基础和抑菌能力影响因素进行了分析。结果表明19株乳酸菌中菌株F19对大肠杆菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径为(15.07±0.55) mm,而F11发酵上清液对大肠杆菌完全没有抑制效果,菌株F16对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径为(14.47±0.38) mm,而F6、F2发酵上清液对金黄色葡萄球菌完全没有抑制效果;抑菌的物质基础分析表明,酸性环境在抑菌过程中占主导地位,细菌素与过氧化氢发挥协同作用;对其发酵上清液进行不同pH以及不同温度处理后发现,其抑菌活性在pH0.05),F11发酵上清液在100 ℃热处理30 min后抑菌能力显著减弱(P<0.05),其余实验菌株发酵上清液温度达到60 ℃以上,抑菌能力随热处理温度提高而显著(P<0.05)下降。本研究发现了乳酸菌发酵上清液的抑菌效果具有特异性,抑菌物质主要是酸性物质,其次是细菌素和过氧化氢;抑菌能力受pH和温度影响,同时具有特异性。研究结果可为优质菌种资源开发提供理论指导与技术支持。

• 产GABA乳酸菌的筛选鉴定及其发酵条件研究

  李欢, 潘道东, 吴振, 曾小群, 吴爱娟

  为了筛选得到一株高产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的乳酸菌,本研究选取传统发酵食品作为菌株来源,采用薄层层析法和高效液相色谱法对分离出的20株乳酸菌的GABA生产能力进行定性和定量分析,并对高产菌株进行种属鉴定及产GABA影响因素研究。结果表明:从传统发酵食品中分离得到一株GABA高产菌株14#,其发酵液中GABA含量为2.30 g/L,经菌落形态、生理生化特性以及16S rDNA基因序列分析鉴定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),研究其产GABA的影响因素并确定发酵优化条件为:MRS基础发酵培养基中以15 g/L的葡萄糖作为碳源,以10 g/L的酵母粉和15 g/L的牛肉膏作为复合氮源,添加1.5% L-谷氨酸钠,接种量为4%,初始pH为6.0,37 ℃静置培养48 h。优化后GABA含量可达9.12 g/L,比优化前产量(2.30 g/L)提高了近3倍。

• 产低温几丁质酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化

  陈立功, 吴家葳, 张庆芳, 迟乃玉, 王晓辉

  目的:筛选产低温几丁质酶菌株,并对其进行鉴定及发酵条件优化。方法:本实验以渤海海域海泥为样品,以胶体几丁质为唯一碳源,通过平板筛选法筛选产低温几丁质酶细菌,对其进行形态学鉴定和分子生物学鉴定,并对其发酵产酶条件进行了单因素优化。结果:菌株鉴定结果为发光杆菌(Photobacterium sp.),单因素优化结果为:胶体几丁质12.0 g/L、酵母膏6.0 g/L、发酵温度15 ℃、初始pH7.0、转速为220 r/min、装液量75 mL/250 mL、接种量1%、发酵时间96 h,酶活力达4.566 U/mL,比优化前提高389.91%。结论:为下一步酶学性质研究及低温几丁质酶在工业中的应用提供参考。

• 定量代谢物组学研究硫酸铵添加对高产红色糖多孢菌生理代谢的影响

  徐峰, 原玉洁, 黄明志, 储炬

  为了考察添加硫酸铵对高产红色糖多孢菌生理代谢的影响,首先研究了硫酸铵添加对菌体量、红霉素效价、比葡萄糖消耗速率、比红霉素合成速率等表观生理参数的影响;并进一步采用13C辅助的定量代谢物组学初步探索其调控机理,对比了硫酸铵添加后胞内有机酸、氨基酸等代谢物水平的变化情况。结果表明:在红霉素发酵后期的培养基中添加硫酸铵后,比红霉素合成速率和比葡萄糖消耗速率分别比对照组提高了30.0%、47.2%,表明菌体代谢活性得到提高。与对照组相比,红霉素效价从830 μg/mL提高至1126 μg/mL,红霉素A组分的比例从802.9 μg/mL提高到956.1 μg/mL,红霉素C的转化率在96 h达到99.2%。定量代谢物组学结果表明添加硫酸铵后胞内有机酸水平差异明显,其中α-酮戊二酸浓度的降低(4.15 μmol/g DCW到1.05 μmol/g DCW)有利于菌体生长维持。胞内菌体合成前体类和红霉素合成前体类氨基酸均有所提高,其中脯氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸浓度分别提高了60.4%、90.0%、204.2%、106.7%。利用定量代谢物组学研究红霉素发酵过程中氮源对胞内中心碳代谢影响大大加深了对红霉素工业生产菌代谢特性的认识,为后续的工业化生产提供了一定的指导意义。

• 一株拮抗酿酒葡萄灰霉病的枯草芽孢杆菌T3筛选、鉴定及抑菌分析

  夏俊芳, 郑素慧, 翟少华, 张志东, 苏金花, 艾赛提, 武运

  为筛选出对酿酒葡萄灰霉病具有良好抑制作用的拮抗菌,从酿酒葡萄根际土壤进行微生物分离,以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)为靶标菌株,采用牛津杯法对拮抗菌进行筛选,通过形态学、生理生化特征以及16S rDNA进行鉴定分析,对拮抗菌进行生长特性及抑菌分析。结果表明:筛选出一株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)具有显著抑制作用的T3菌株,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),培养24~48 h T3菌株进入稳定期,最适的生长温度为37 ℃,最适pH为7.0。T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)MIC为3.6×105 CFU/mL,MBC为3.6×106 CFU/mL,3.6×109 CFU/mL T3菌株对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)抑菌直径为31.6±0.2 mm(P<0.05),抑菌效价为158.0±1.0 mm/mL(P<0.05)。扫描电镜观察T3菌株造成灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌丝畸形、扭曲、顶端膨大、原生质收缩、孢子稀松,抑制菌丝生长及孢子萌发。本实验为酿酒葡萄灰霉病的生物防治提供新的微生物资源,具有进一步研究价值。

• 8种乳酸菌发酵荔枝汁-大豆蛋白的氨基酸代谢特征研究

  刘欣, 刘芸, 陈梅春, 郑雪芳, 陈峥, 王阶平, 刘波

  本文目的在于探究8种乳酸菌发酵荔枝汁-大豆蛋白的氨基酸代谢差异,分析不同乳酸菌的氨基酸代谢特征。本研究以荔枝汁-大豆蛋白为培养基,选择8种乳酸菌在37 ℃温度下培养18 h,测定发酵前后乳酸菌发酵液活菌数及氨基酸含量。结果表明,发酵前后共检测到17种氨基酸,发酵后氨基酸总量从582.79 mg/100 g下降至427.97 mg/100 g。不同乳酸菌发酵后的氨基酸总量差异明显,副干酪乳杆菌FJAT-13741(365.95 mg/100 g)<嗜热链球菌FJAT-43774(369.36 mg/100 g)<发酵乳杆菌FJAT-13771(411.03 mg/100 g)<植物乳杆菌FJAT-13737(417.54 mg/100 g)<短乳杆菌FJAT-43776(438.14 mg/100 g)<鼠李糖乳杆菌FJAT-13807(462.38 mg/100 g)<嗜酸乳杆菌FJAT-13772(477.65 mg/100 g)<德氏乳杆菌FJAT-43773(481.52 mg/100 g)。聚类分析结果显示,8种乳酸菌的氨基酸代谢特征分为3组,高含量组含1种氨基酸、中含量组含5种氨基酸、低含量组含11种氨基酸;根据氨基酸含量,8种乳酸菌可分为三类,高含量组含3种乳酸菌,中含量组含3种乳酸菌,低含量组含2种乳酸菌。进一步构建了乳酸菌的氨基酸代谢特征指数(AAMCI),表示功能性氨基酸占氨基酸总量的比值,其中比值最高的为德氏乳杆菌FJAT-43773(54.32%),最低的为嗜热链球菌FJAT-43774(47.82%)。研究结果将为荔枝乳酸菌饮品研制菌株的筛选提供理论依据。

• 响应面优化栀子果实不同部位油脂提取工艺及其脂肪酸分析

  刘嘉琪, 杨涛, 缪芝硕, 祝廷辉, 邝鼎, 陈建荣, 唐伟卓

  为了考察采用超声波提取栀子果皮、果肉两个不同部位油脂的工艺,以石油醚为提取溶剂,通过单因素实验和响应面法对其工艺进行优化。利用气相色谱-质谱法(GC-MS)技术对栀子油脂进行脂肪酸含量分析。结果显示,超声提取栀子果皮油脂的最佳工艺条件为:提取时间60 min、提取功率320 W、料液比1∶13 g/mL。超声提取栀子果肉油脂的最佳工艺条件为:提取时间58 min、提取功率360 W、料液比1∶12 g/mL。在上述条件下,栀子果皮、果肉油脂的得率分别可达2.36%和22.60%。扫描电镜(SEM)结果显示,超声波可以破坏栀子果实细胞排列方式和整齐程度,促进油脂性成分溶出。GC-MS实验结果表明,栀子果肉油脂中不饱和脂肪酸含量为75.97%,以亚油酸(52.70%)和油酸(21.90%)为主;栀子果皮油脂中不饱和脂肪酸含量为69.22%,以亚油酸(44.80%)和油酸(13.55%)为主。上述研究结果可为栀子油脂合理利用及开发提供参考。

• 超微冷冻粉碎处理下酸枣仁蛋白提取工艺优化

  谭力铭, 裴海生, 赵丹丹, 胡高爽, 郝建雄, 张敬轩

  采用超微粉碎和冷冻粉碎技术对酸枣仁渣进行前处理,在单因素实验基础上,以料液比、pH、提取温度、提取时间为实验因素,采用响应面分析法,对酸枣仁蛋白的提取方法进行了优化。试验结果表明采用超微粉碎和冷冻粉碎条件下酸枣仁蛋白提取率显著高于普通粉碎条件(P<0.05),4个因素对蛋白提取率影响由大到小顺序为:pH、液料比、提取时间、提取温度。基于超微冷冻粉碎条件下酸枣仁蛋白提取的最佳工艺条件为:料液比为32∶1、pH为11.4、温度为51 ℃、提取时间为58 min。在此条件下蛋白提取率的优化预测值为78.50%,实际蛋白提取率为78.47%±0.17%。此回归模型较好地预测了蛋白提取结果,为酸枣仁加工的废弃物再利用提供了较好的参考依据。

• 亚临界流体萃取富集金盏花中叶黄素工艺优化

  李冰, 刘小波, 张晓雪, 于长青, 贾鸿震, 张小燕, 张辉

  本试验以金盏花颗粒为研究对象,在单因素实验和Plackett-Burman试验设计的基础上,探讨金盏花颗粒尺寸、萃取时间、萃取压力、萃取温度和萃取次数对叶黄素萃取工艺的影响,并采用Box-Behnken中心试验设计优化亚临界流体(R134a)萃取富集叶黄素工艺。结果表明:单因素条件下,金盏花颗粒尺寸、萃取时间、萃取压力、萃取温度和萃取次数均对叶黄素含量富集有一定影响;通过Plackett-Burman试验筛选出萃取时间、萃取温度、萃取次数三个因素对叶黄素含量富集作用极显著的因素(P<0.01);并对筛选出的三因素进行亚临界流体萃取富集金盏花中叶黄素响应面工艺优化,其最优工艺为:金盏花颗粒尺寸10 mm、萃取时间44 min、萃取压力1.2 MPa、萃取温度39 ℃、萃取次数4次。在此条件下,亚临界萃取物中叶黄素富集含量可达到32.28%,与预测值相差0.44%,同时亚临界流体萃取叶黄素效果明显高于有机溶剂萃取法和超临界CO2萃取法。本研究可为金盏花中叶黄素的产业化研究提供理论参考。

• 响应面法优化野金柴总黄酮超声辅助提取工艺及其不同组分抗氧化能力研究

  李洪安, 李夏嘉龙, 邓泽元, 江和栋, 李红艳

  采用超声辅助提取野金柴中的黄酮类化合物,研究液料比、乙醇浓度、超声功率、超声时间对提取得率的影响,并采用响应曲面法优化提取工艺条件。采用ADS-7大孔树脂对野金柴中的根皮苷进行分离,分析总黄酮、根皮苷、黄酮R(除去根皮苷后的剩余黄酮组分)的抗氧化活性。结果表明,各工艺条件对野金柴总黄酮得率的影响为:超声时间>乙醇浓度>超声功率>液料比,优化所得最佳的提取工艺条件为:液料比40∶1,乙醇浓度80%,超声功率540 W,超声时间60 min,在此条件下野金柴总黄酮得率为8.82%±0.09%。总黄酮、根皮苷、黄酮R清除DPPH自由基的IC50值分别为0.0205、0.0222、0.0261 mg/mL;清除ABTS自由基的IC50值分别为0.0220、0.0233、0.0266 mg/mL,总黄酮抗氧化能力最强,根皮苷其次,再次为黄酮R,三者都有较好的DPPH和ABTS自由基清除能力。

• 超声波辅助提取玉木耳多糖及其抗氧化活性分析

  吴玉柱, 崔维建, 李妍

  以玉木耳为原料,考察液料比、超声功率、超声温度和超声时间对多糖得率的影响,在单因素试验基础上,通过响应面分析法优化提取工艺条件,采用傅里叶红外光谱(FT-IR)对多糖结构进行初步表征,并通过测定玉木耳多糖清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基能力、铁离子还原能力(FRAP 法)和氧自由基清除能力(ORAC 法)研究其体外抗氧化活性。结果表明,超声波辅助法提取玉木耳多糖最优工艺为:液料比40∶1 mL/g,超声功率210 W,超声温度62 ℃,超声时间29 min,此工艺条件下玉木耳多糖的得率为7.43%;玉木耳多糖显示出多糖的典型特征吸收峰,是以β-糖苷键为主的吡喃型多糖;玉木耳多糖清除DPPH自由基IC50值为1.445 mg/mL,FRAP值和ORAC值分别为35.14±0.16 mmol Trolox g-1和0.627 mg Trolox mg-1,具有较好的抗氧化能力,可作为天然抗氧化剂应用。

• 基于均匀设计和主成分分析的即食捻转加工及灭菌工艺优化

  何梦影, 张康逸, 朱笑鹏, 王莉, 张灿, 赵迪

  采用单因素实验与均匀设计试验相结合,进行即食捻转的工艺优化,并在此基础上,通过主成分分析建立捻转在贮藏期内的品质综合评价模型,对灭菌工艺进行优化。结果表明:以每公斤青麦仁计,食盐添加量为21.5 g,花椒与辣椒添加量为25.0%(两者质量分别为102.4 g、147.9 g),菠菜粉添加量为6.5 g,浸泡时间为79 min,焙烤时间为63 min,制作的即食捻转感官评分为96.29。最佳灭菌工艺主成分分析中选取2个主成分能解释全部指标90.003%的信息,达到降维的目的,100 ℃蒸煮6 min-紫外杀菌10 min,对即食捻转的灭菌效果最佳。此试验结果为即食捻转工业化生产提供理论依据。

• 复凝聚法青鱼内脏鱼油微胶囊的制备及其性能研究

  王正云, 展跃平, 钟川, 蒋慧亮

  为提高鱼油稳定性,以青鱼内脏鱼油为芯材,大豆分离蛋白(SPI)和壳聚糖(CS)为壁材,制备鱼油微胶囊。采用单因素实验考察了均质速度、pH、壁材总质量分数、SPI/CS比值、芯壁比等因素对鱼油微胶囊制备效果的影响,结合响应面法优化鱼油微胶囊制备工艺,并比较研究了鱼油微胶囊湿囊分别经喷雾干燥和冷冻干燥两种干燥方法所得产品的包埋率、水分含量、贮藏稳定性。结果表明,最佳鱼油微胶囊制备工艺条件为:pH7、壁材总质量分数2%、SPI/CS比值1.3∶1、芯壁比1.3∶1,在此条件下鱼油包埋率为71.98%±0.16%。喷雾干燥法表面含油率为0.73%±0.04%,低于冷冻干燥法3.62%±0.09%,包埋率为71.98%±0.16%,高于冷冻干燥法56.76%±0.37%,说明喷雾干燥法效果优于冷冻干燥法,鱼油微胶囊贮藏期可较未包埋的鱼油延长6 d以上。通过微胶囊化,改善了青鱼内脏鱼油的性能,提高了使用范围和应用价值。

• 莼菜水馒头制作配方的优化

  陈倩玉, 申勤勤, 陈兰, 白静, 褚之琳, 汪昌保

  以感官评价和失水率作为评判标准,通过单因素实验分析、单纯形格子法和响应面优化方法,探究莼菜、菱角粉、葛根粉、马蹄粉、糖浓度和琼脂粉等最佳配比,研制出一种莼菜水馒头新型功能食品。最佳配方为:(100 mL水为标准,百分比皆为占水的比例)莼菜7.29%、菱角粉2.54%、葛根粉0.62%、马蹄粉0.20%、蔗糖6.74%、琼脂1.88%,在此条件下,制备的产品感官评分为78.58,失水率为3.70%,综合得分为0.93。产品口感滑嫩,软硬适中,具有浓郁的菱角和莼菜的香气。

• 沙棘黄酮的分离纯化及其抗运动性疲劳作用

  王玉, 刘琦, 耿杰

  为优化大孔树脂纯化沙棘果黄酮提取物的工艺条件,通过等温静态吸附与洗脱试验,筛选适宜的树脂类型,研究其吸附机制后,利用动态吸附与洗脱单因素实验优化沙棘果黄酮提取物的纯化工艺,并考察其体内抗疲劳功效。结果显示,D101大孔树脂吸附沙棘黄酮性能较好,且易于被乙醇洗脱,吸附量随初始浓度的增加而增大,随温度的升高而降低,吸附等温线符合Langmuir等温吸附模型,吸附动力学过程符合准一级动力学方程。最佳纯化工艺条件为:70 mL 3 mg/mL上样溶液(pH5.0),以1 mL/min流速上样后,采用160 mL 70%乙醇溶液,于1 mL/min流速洗脱,产物的黄酮含量由18.25%提高至59.07%,约为纯化前3.2倍。与空白对照相比,不同剂量的沙棘黄酮纯化产物可显著延长小鼠的运动时间(P<0.05),同时,中、高剂量的纯化产物有助于改善运动后体内的肝、肌糖原与乳酸的浓度水平和乳酸脱氢酶活力(P<0.01),从而具有较好缓解机体疲劳的作用,该研究可为沙棘果的开发提供参考。

• 罗耳阿太菌多糖对Cu²⁺和Cd²⁺的吸附工艺优化及表征

  刘玉琪, 李鸿梅, 范春婷, 闵伟红, 高雅文

  以罗耳阿太菌多糖(Athelia rolfsii polysaccharide,AEPS)为生物吸附剂,探究其对水中铜(Cu2+)和镉(Cd2+)重金属离子的吸附。在单因素实验的基础上,采用正交试验优化AEPS吸附Cu2+和Cd2+效果,通过扫描电子显微镜(SEM)、X射线能谱仪(EDS)和傅里叶红外光谱仪(FTIR)对AEPS吸附重金属离子前后的表面形貌进行表征和分析,初步揭示了AEPS吸附Cu2+和Cd2+机理。结果表明,Cu2+吸附效果最优条件为:pH4.5,AEPS浓度1.5 g/L,吸附温度40 ℃,吸附时间45 min时,Cu2+吸附率为88.27%;Cd2+吸附效果最优条件为:pH6.5,多糖浓度1.5 g/L,吸附温度45 ℃,吸附时间60 min时,Cd2+吸附率为77.81%。SEM、EDS和FTIR结果表明,AEPS中的O-H、C-H、C-O和CCO官能团参与吸附反应,吸附Cu2+和Cd2+的AEPS的表面结构也发生明显变化,试验结果表明AEPS对Cu2+和Cd2+有良好的吸附作用。

• 微波辅助法提取火龙果果皮色素及其功能活性研究

  胡元庆, 王建荟, 李凤霞

  优化火龙果果皮色素的微波辅助法提取工艺,并对色素的功能特性进行初步研究。以火龙果果皮为原料,在单因素实验的基础上,采用正交实验设计对火龙果果皮色素的提取工艺进行优化,并研究了真空干燥色素的抗氧化活性和抑菌活性。结果表明:在料液比1∶50 (g/mL)、乙醇浓度20%、微波功率440 W、微波处理时间60 s的条件下,火龙果果皮色素的提取效果最佳,色素得率为1.074%;2~10 mg/mL提取物对羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)和DPPH·均具有清除作用,其中对O2-·的清除效果最好,比VC的清除效果略低;提取物对大肠杆菌的最低抑菌浓度为1.25 mg/mL,最低杀菌浓度为2.5 mg/mL,抑制效果最好,其次金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、志贺氏菌和蜡状芽孢杆菌。本研究优化了微波辅助提取火龙果果皮色素的工艺条件,所得提取物有较好的抗氧化活性,且对常见食源性病原菌有较强的抑菌活性。

• 蒜黄根膳食纤维提取工艺优化及其理化性质分析

  马斌, 罗延丽, 王永康, 刘鑫燕, 刘云国, 康大成

  为了优化蒜黄根膳食纤维提取工艺并分析提取的蒜黄根TDF理化性质,首先对酶解pH、酶解温度、酶解时间进行单因素实验;采用Box-Behnken试验设计,确定蒜黄根TDF提取的最佳工艺条件;最后对提取得到的蒜黄根TDF持水性、持油性、膨胀性、吸附葡萄糖和胆固醇能力以及抗氧化能力等理化性质进行分析。结果表明,蒜黄根TDF得率的最佳提取工艺条件为:酶解pH7.0、酶解温度62 ℃、酶解时间2.3 h。在最优条下蒜黄根TDF得率为72.47%±0.08%,与模型预测值72.59%基本一致。提取后的蒜黄根TDF持水性(8.63 g·g-1)、持油性(6.57 g·g-1)、膨胀性(6.27 mL·g-1)以及对葡萄糖和胆固醇的吸附能力(8.00 mg·g-1和10.52 mg·g-1)均显著高于蒜黄根粉(P<0.05)。然而蒜黄根TDF的抗氧化能力和总酚含量较蒜黄根粉显著降低(P<0.05)。因此,蒜黄根TDF可作为肉类和粮油类食品的优质添加剂,开发新型健康食品,提高蒜黄种植产业的资源利用率与产品附加值。

• 海水鱼丸加工工艺及外源添加剂对高温杀菌后鱼丸品质保持研究

  常莉莉, 崔浩哲, 张志慧, 于佳卉, 杨贺, 唐越

  为获得耐高温杀菌的高品质海水鱼丸,本文以海水杂鱼糜为原料,确定制作海水鱼丸最佳工艺参数后,以白度、持水性、弹性、硬度、凝胶强度、热稳定性及微观结构为指标,研究添加卡拉胶、转谷氨酰胺酶(TG酶)或两者复配对高温杀菌后鱼丸品质保持的影响。结果发现:以海水杂鱼糜质量为基数,淀粉添加15%,大豆蛋白添加4%,食盐添加1%,姜粉添加1%,料酒添加3%,水添加40%,葱末添加3%时海水鱼丸具有较好的感官品质。外源添加剂的加入可显著改善高温杀菌后海水鱼丸的弹性、凝胶强度、硬度及热稳定性(P0.05),其中卡拉胶∶TG酶为3∶7时,海水鱼丸的持水性为80.73%±0.78%,硬度为(470.96±15.09) g,能够有效减少鱼糜凝胶网状结构的空间间隙,具有较好的热稳定性,与单独添加卡拉胶或TG酶相比,两者复配后能够有效改善高温杀菌后海水鱼丸的食用品质。

• 不同包装方式对土豆烧牛肉菜肴中牛肉贮藏品质的影响

  孙金龙, 刘莉丹, 张春江, 陈永凯, 师希雄, 黄峰

  本试验主要对比了免拆膜包装、真空包装和托盘包装对土豆烧牛肉菜肴中牛肉的菌落总数、色值、水分活度、水分含量、硬度、弹性等指标来阐述不同包装方式对土豆烧牛肉菜肴中牛肉贮藏品质的影响。结果表明,随着储藏时间延长,三种包装方式样品的菌落总数逐渐升高,其中贮藏4~11 d时,菌落总数上升最快,储存到21 d后,真空包装样品的菌落总数达到4.68 lg(CFU/g),免拆膜包装达到5.04 lg(CFU/g),菌落总数超标托盘包装样品已腐败;贮藏后期真空包装的土豆烧牛肉菜肴中牛肉的水分含量和水分活度分别达到50.25%和0.97,均高于免拆膜包装和托盘包装;真空包装的感官评分值为8.18,显著高于其他两种包装(P0.05);真空包装的色值、硬度、弹性等食用品质指标均优于免拆膜包装和托盘包装。由此可知,真空包装的土豆烧牛肉中牛肉的食用品质最好且可以长时间保存,免拆膜包装方式操作简单,但其包装效果不及真空包装,但明显优于托盘包装,这为土豆烧牛肉菜肴的工业化生产提供了可靠的理论依据。

• 原料脂肪氧化程度对西式培根安全品质的影响

  姜皓, 杨璐, 徐文怡, 杨华, 马俪珍

  为了解原料肉中脂肪氧化程度对西式培根安全品质的影响,本试验以反复冻融的方式制备3组不同氧化程度的脂肪,F0组的硫代巴比妥酸值(Thiobarbituricacidresctive substances,TBARS)为0.04 mg/kg,F1组的TBARS值为0.09 mg/kg,F2组的TBARS值为0.30 mg/kg,将3组脂肪与绞碎的新鲜猪瘦肉混合加工成3组西式培根产品,测定成品和成品煎烤后样品中亚硝酸盐残留量、生物胺、N-亚硝胺(N-nitrosoamines,NAs)以及其它相关指标的变化。试验结果表明,随着原料脂肪氧化程度的增加,西式培根的pH、红度值、总巯基含量、多不饱和脂肪酸含量(PUFA)呈现逐渐降低的趋势(P0.05)。随着原料脂肪氧化程度的增加,西式培根的TBARS值、羰基、总生物胺、N-亚硝基二甲胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)含量有升高的趋势,特别是煎烤后的N-亚硝基吡咯烷(N-nitrosopyrrolidine,NPYR)、N-亚硝基哌啶(N-nitrosopiperidine,NPIP)和组胺含量显著升高(P<0.05)。在西式培根这个脂肪-蛋白的混合体系中,脂肪的氧化会促进蛋白的氧化,促进NAs、生物胺和NDMA的生成,最终会影响到产品的安全品质,所以在实际生产中应严格控制原料脂肪的新鲜度,以提高西式培根产品的品质和安全性。

• 超声辅助酸解-超高效液相色谱-电雾式检测器测定灵芝多糖的单糖组成

  梁琰, 赵志国, 张敏敏, 刘倩, 耿岩玲, 王晓, 赵恒强

  目的:建立超声辅助酸解-超高效液相色谱-电雾式检测器(UAH-UPLC-CAD)法测定灵芝多糖的单糖组成的方法,为药食两用真菌多糖的单糖组成研究提供快速分析方法支持。方法:以赤芝为研究对象,对灵芝多糖超声辅助酸解条件进行系统优化,采用Waters ACQUITY UPLC Amide柱(3.0 mm×100 mm,1.7 μm),梯度洗脱(A为0.8%甲酸水溶液,B为乙腈),流速:0.4 mL·min-1,柱温:25 ℃,采用CAD检测器,其中:雾化器温度35 ℃,N2压力61.2 Psi。结果:获得了最佳的超声辅助酸解工艺条件:超声功率270 W、水解温度70 ℃、水解时间1 h;在优化的UPLC-CAD条件下,各化合物分离较好、灵敏度较高,方法具有较好的精密度、重现性和稳定性;应用该方法测定了灵芝多糖酸解产物中的7种单糖(摩尔比为:鼠李糖∶岩藻糖∶木糖∶阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=5.90∶5.34∶72.64∶31.96∶1.00∶1.89∶5.24),其中,木糖和阿拉伯糖的含量较高,其值分别为27.25±0.67和11.99±0.29 mg/g;而甘露糖和葡萄糖的含量则较低,其值分别为0.45±0.01和0.85±0.04 mg/g。结论:该方法简单、快速、灵敏度高,为药食两用真菌多糖的单糖组成研究提供了方法支持。

• 动力学法优化碱性果胶酶比活的测定方法

  邢明霞, 王鹏博, 许文廷, 张凤国, 吕兴霜, 陈相玉, 邬雅喃, 詹志春, 张永勤

  本文通过优化蛋白浓度测定方法和酶活力测定方法,并以酶解动力学曲线考察方法优化的合理性,以验证终点法测定碱性果胶酶比活的准确性。结果表明,果胶酶蛋白的最佳测定波长为550 nm,其线性和截距明显优于传统方法,可以忽略果胶酶稀释倍数对蛋白测定的影响。钙离子对该酶具有激活作用;聚半乳糖醛酸比果胶更适合作为酶活力测定底物,其最适pH为9.5,最佳浓度为2 mg/mL,果胶酶活力测定的最佳波长为232 nm,所测酶活力在吸光度值0~2范围内均保持零级反应状态,酶蛋白浓度与酶解速率线性相关且回归曲线截距更接近原点,因此,该测定条件不仅可用于终点法,酶解时间也可灵活掌握,而非拘泥于一个固定的时间段。以酶解30 min为例,其检测限(LOD)为0.15 mU/mL。由于DNS法的灵敏度较低,其半乳糖醛酸标准曲线不过原点,从而导致因酶液稀释倍数不同而产生测量误差,因此,紫外法测定碱性果胶酶活力为最佳选择。

• 一种利用反相高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中苯乳酸的方法及其评价

  张雯, 林毅侃, 谢佳雨, 欧杰, 李柏林

  为建立一种反相高效液相色谱法(Reversed phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测乳酸菌发酵液中苯乳酸含量的方法,系统考察了3种固定相、2种流动相有机相、5种水相及其比例对苯乳酸RP-HPLC检测的影响并对方法进行了评价。确定了以双封端C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)为固定相,0.05%三氟乙酸(Trifluoroacetic acid,TFA)-乙腈,体积比75∶25,等度洗脱,流速1 mL/min,检测波长210 nm,柱温30 ℃。在0.2~5.0 mg/L内线性良好,r=0.9998,回收率99.88%~101.08%,检出限0.1400 mg/L,定量限0.4600 mg/L,1 d精密度和重复性相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为0.30%和0.64%,30 d精密度和重复性RSD为0.59%和0.79%,30 d内苯乳酸标准储备液稳定性RSD为2.45%,乳酸菌发酵液中苯乳酸合成量为0.1400 mg/L时,其扩展不确定度为0.0046,95%的置信区间,包含因子k=2。选用短乳杆菌P3(Lactobacillus brevis)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ATCC8014发酵液为检测对象,培养120 h苯乳酸合成量分别为77.58和62.60 mg/L。结果表明,在该方法下苯乳酸能够稳定出峰,检测效率高,检测成本低,操作简单,结果准确可靠,适合检测大批量样品,可为苯乳酸的相关研究提供理论依据。

• 不同采收期对月季花总黄酮含量及其抗氧化活性的影响

  上官琨瑶, 黄秀秀, 宋庸, 张晓婷, 潘斐, 刘怡晨, 蒋万里, 钱慧琴

  目的:通过比较月季花不同采收期总黄酮含量与其抗氧化活性,确定月季花的最佳采收期,为月季花临床用药的有效性奠定理论基础。方法:采用回流提取法提取月季花提取物,紫外分光光度法测定月季花总黄酮含量,以清除1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH·)及羟基自由基(OH·)的能力来评价不同采收期月季花抗氧化活性。结果:不同采收期总黄酮含量变化为:4月份>5月份>9月份>10月份>11月份>6月份>7月份>8月份。以4月份采收月季花总黄酮含量最高,含量达到(152.28±1.69) mg/g。不同采收期月季花提取物均有较好的抗氧化活性,其中7月份采收的月季花提取物体外抗氧化活性最强。结论:月季花提取物中总黄酮含量与其抗氧化活性正相关,但其抗氧化活性受采收期和提取物中的其他杂质的影响。

• 基于ICP-AES的不同产地干姜无机元素分析与评价

  邹冬倩, 严辉, 李鹏辉, 濮宗进, 周桂生, 郭盛, 杨健, 黄胜良

  建立了一种基于电感耦合等离子体-原子发射光谱(ICP-AES)的分析方法,对山东、云南、四川、贵州四个产地的干姜中无机元素进行分析与评价。采用湿法消解处理干姜样品,并对28批干姜样品中的32种无机元素的含量进行检测,将无机元素含量数据导入SIMCA-P 14.0软件,进行聚类分析与主成分分析,将去皮与不去皮的干姜样品中重金属元素进行比较。结果发现:干姜中富含K(22587.83~92248.51 mg/kg)、P(1778.29~4449.33 mg/kg)、Mg(1848.98~4293.83 mg/kg)、Na(39.72~1216.93 mg/kg),还含有微量元素Mn(79.16~3864.6 mg/kg)、Fe(27.84~960.26 mg/kg)、Zn(14.3~55.45 mg/kg),而重金属元素Pb(0.21~1.93 mg/kg)、As(<1.01 mg/kg)、Cu(2.40~7.96 mg/kg)含量较低,Cd(0.02~0.50 mg/kg)和Hg(<6.19 mg/kg)含量较高。主成分分析与聚类分析发现:四川、云南、贵州产干姜在无机元素的组成上较为相似,与山东产干姜差异较大。干姜在经过去皮处理之后,各重金属元素含量显著降低。本研究分析了不同产地干姜中无机元素的组成差异,通过去皮处理的干姜,安全性得到提高,为干姜的产地加工提供科学依据。

• 低场核磁共振在线检测巧克力的熔化过程

  陈芳宇, 陈超, 赵大伟, 张松平, 马光辉, 苏志国, 李秀男

  构建了低场核磁共振(LF-NMR)在线控温分析系统,对不同品种巧克力的熔化过程进行了表征,研究了可可脂和粗脂肪含量对巧克力熔化温度的影响。通过对样品的程序升温,持续测定了巧克力的横向弛豫时间(T2),对四个不同品牌巧克力的熔化过程进行了评价。结果表明,巧克力熔化过程中T2值随温度增大,巧克力中液体脂肪的运动性增强,且熔化温度随可可脂和粗脂肪含量的增加而升高。本文首次利用LF-NMR在线控温分析系统实时在线检测了巧克力熔化过程,并直观准确地测定了巧克力的熔化温度,为改善巧克力的加工工艺和配方提供了理论指导。

• 响应面法优化高效液相色谱分析蜂蜜中5种生物胺的衍生条件

  梁梦洁, 黄丽佳, 刘欣, 李晶, 宋春满, 张建铎

  为确定高效液相色谱测定蜂蜜中5种生物胺(腐胺、精胺、尸胺、亚精胺、组胺)的最佳衍生化条件,在单因素优化基础上,采用响应面设计对衍生体系pH、衍生温度和时间等参数进行了优化,建立了5种生物胺的峰面积响应面模型。结果表明,建立的响应面模型拟合良好,各个模型的校正R2均大于0.99,响应预测值与实际值吻合度高,预测R2均大于0.99。3个衍生条件均能明显影响生物胺峰面积响应,影响大小依次为pH、衍生温度、衍生时间;pH和衍生时间存在显著交互作用(P<0.05)。最优的衍生条件为pH11、衍生温度45 ℃、衍生时间40 min,在此条件下衍生,5种生物胺的峰面积响应较好。使用两个浓度的生物胺溶液进行的验证实验结果与预测值相对偏差数值在2.32%~4.94%之间。

• 分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定豆芽中6种喹诺酮类药物

  张今君, 夏慧丽, 高海波

  本文建立了豆芽中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、培氟沙星6种喹诺酮类药物残留的分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱的快速测定方法。豆芽样品中6种喹诺酮药物采用1%甲酸乙腈提取,提取液经N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基键合硅胶(C18)、无水硫酸镁(MgSO4)、石墨化碳(GCB)4种填料净化,净化液过滤膜后经ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸水流动相梯度分离,采用UPLC-MS/MS多反应监测模式进行测定,同位素内标法定量。结果显示:6种喹诺酮类药物在1.0~100.0 μg/L浓度范围内线性关系良好(r≥0.9982),检出限为0.1~0.3 μg/kg,定量限为0.3~1.0 μg/kg,在2、4、20 μg/kg三个浓度添加水平的回收率为96.53%~106.94%,相对标准偏差为2.73%~7.60%。该方法快速简便、灵敏度高、准确度高、重现性好,适用于豆芽样品中6种喹诺酮类药物的同时检测。

• 7个不同品种藜麦营养成分比较分析

  陈志婧, 廖成松

  以陇藜1号、香格里拉白藜、香格里拉红藜、香格里拉黑藜、太旗白藜、太旗红藜、太旗黑藜为材料,对不同品种藜麦的营养成分、氨基酸和矿质元素进行了含量测定和分析比较。结果表明,7个不同品种藜麦的营养成分存在差异,其中太旗黑藜蛋白质含量高达16.52 g/100 g、脂肪含量为3.38 g/100 g,总膳食纤维含量11.07 g/100 g,其高蛋白质、低脂肪、高总膳食纤维特性尤为突出,更适合有减肥需求或素食主义群体。藜麦富含氨基酸,主要以谷氨酸、精氨酸和天冬氨酸为主,酪氨酸、组氨酸和蛋氨酸则含量较低。其中陇藜1号和香格里拉红藜主要氨基酸(谷氨酸、精氨酸和天冬氨酸)均高于其他品种,且其必需氨基酸(EAA)含量也明显较高。对必需氨基酸进行评分的结果表明,太旗白藜和香格里拉红藜必需氨基酸含量评分最优,更适合婴幼儿群体。另外,藜麦含有丰富的矿质元素,7个品种藜麦中K、Ca、Cu、Mg的含量都高于小麦、水稻和小米,尤其是香格里拉黑藜K含量高达12037 mg/kg,而Na含量在检出限以下,具有高钾低钠的良好营养特性,更适合中老年群体。本文为开发特定群体的藜麦功能食品的品种选择提供了依据。

• 基于高灵敏度荧光衍生剂的痕量维生素C液相检测方法建立

  沈海波, 张连钢, 周鑫魁, 方剑儒, 洪霞, 刘善鑫, 莫慧娟, 张婧蕾

  利用1.0 g/L 6-羟基-2,4,5-三氨基嘧啶作为荧光衍生剂,与水溶液中维生素C在pH为6.5±0.5反应条件下,40 ℃衍生反应30 min生成具有强荧光性的衍生产物。试验中对维生素C提取条件,衍生条件,色谱条件进行探索性研究及优化。在使用pH=4.0乙酸铵缓冲液(v)+乙腈(v)+甲醇(v)=80+15+5作为流动相的色谱条件下,该衍生物色谱行为稳定,并产生很强的荧光信号。配合高效液相色谱-荧光检测器对其含量进行检测。该方法检测维生素C具有检测结果准确,回收率为90.9%~96.7%,实验数据稳定RSD≤2%,灵敏度高方法检出限0.2 μg/g,检测线性范围0.05~500 μg/g,相关性系数良好,y=93322x-1837.8,R2=0.9999,实验操作简便,无需重复制备空白样品操作等特点,更适合实验室批量检测任务。并对6-羟基-2,4,5-三氨基嘧啶作为荧光衍生剂的使用提供一定的参考。

• 低压静电场处理对带鱼微冻贮藏期间品质变化影响

  张家玮, 谢超, 余铭, 张海玲

  为研究低压静电场技术(Low voltage electrostatic field,LVEF)对带鱼微冻贮藏保鲜过程中品质变化影响,本文以新鲜舟山带鱼为实验原料,由冷冻曲线法得其冰点后予以分组。其中,实验组在-4 ℃条件下进行低压静电场(3000 V、50 Hz)处理,以未做电场处理样品为对照组。期间,分别进行两组样品的pH、总挥发性盐基氮(TVB-N)、硫代巴比妥酸值(TBA)、菌落总数(TVC)与K值测定,结合苏木精-伊红(Hematoxylin＆Eosin,H＆E)染色与扫描电镜(SEM)分析,综合评价LVEF协同微冻对带鱼贮藏期间品质变化的影响。结果表明:对照组样品在第21 d时的TVB-N值为29.81 mg/100 g,接近不可食状态;第28 d时的TBA值为1.78 mg MDA/100 g,TVC值超过腐败限值,K值增至88.71%,背肌肌肉纤维变形收缩,产生严重扭曲折叠,鱼体腐败严重;而处理组样品在第28 d时的TVB-N、TBA与TVC值均低于对照组,pH变化幅度不明显,K值为63.17%,细胞间结构完整大小均匀,仅有轻微组织损伤,保鲜效果好。因此,LVEF技术能有效缓解带鱼微冻贮藏过程中的品质劣变,与对照组相比,其可延长微冻带鱼货架期7 d。

• 24-表油菜素内酯处理对低温贮藏仔姜品质的影响

  游玉明, 汤洁, 胡凯, 杨彬, 张美霞

  为延长仔姜保藏期,探讨了外源24-表油菜素内酯(24-epibrassinolide,EBR)处理对低温贮藏仔姜品质的影响。将仔姜分别采用5、10 μmol/L EBR溶液浸泡30 min,以蒸馏水为对照,在4 ℃下低温贮藏25 d,定期监测其冷害发病率、色泽、VC、姜辣素、总黄酮、可溶性糖和可溶性蛋白的变化。结果表明:EBR处理显著抑制了仔姜在低温贮藏期间冷害发病率的上升(P<0.05),维持良好的色泽,并保持较高的VC、姜辣素、总黄酮、可溶性糖和可溶性蛋白水平。贮藏结束时,10 μmol/L EBR处理组的冷害发病率仅为对照的38.4%(P<0.05),而姜辣素、总黄酮、可溶性蛋白含量分别高出对照的27.6%、25.0%和40.8%(P<0.05),VC、可溶性糖分别为对照的1.71和2.50倍(P<0.05)。EBR处理可提高仔姜在低温贮藏下的耐冷性和贮藏品质,具有较好的应用前景。

• 核桃青皮乙醇提取物对采后无花果的保鲜效果

  刘伟, 曹文利, 薛雨菲, 杨永兴, 杨茜, 李芳, 孔令明

  为解决无花果采后贮藏保鲜和核桃采收后核桃青皮资源浪费的问题,本文探究核桃青皮提取物对无花果的保鲜作用。以硬度、可滴定酸含量、维生素C含量、呼吸速率为指标,在常温环境和低温(0±2) ℃条件下,测定浓度为3%、5%的核桃青皮乙醇提取物和0.3 mol/L CaCl2处理后无花果的生理生化变化情况。结果表明:在常温环境保存5 d后,5%的核桃青皮乙醇提取物处理无花果的硬度、可滴定酸含量、维生素C含量、呼吸速率分别为4.52 N、0.19%、25.83 mg/100 g、25.99 mg CO2/(kg·h),在低温环境冷藏30 d后,5%的核桃青皮乙醇提取物处理无花果的硬度、可滴定酸含量、维生素C含量、呼吸速率分别为5.42 N、0.14%、35.83 mg/100 g、15.64 mg CO2/(kg·h)。在常温和低温环境下5%的核桃青皮乙醇提取物对无花果果实的保鲜效果仅次于0.3 mol/L CaCl2化学处理组,且无花果果实的品质和风味均能得到较好的保持,故选择5%核桃青皮乙醇提取物作为植物源保鲜剂。

• 大豆不溶性膳食纤维对高脂饮食诱导小鼠肥胖的预防作用

  王赛男, 于寒松, 谷春梅, 贺阳, 张田, 徐锡奇

  目的:研究大豆不溶性膳食纤维(Soybean insoluble dietary fiber,SIDF)对高脂饮食(High fat diet,HFD)诱导小鼠肥胖的预防作用及其机理。方法:将50只C57BL/6J小鼠随机分为正常饮食对照组(Normal diet,ND)、高脂饮食对照组(HFD)和大豆不溶性膳食纤维低(Low-dose soybean insoluble dietary fiber,LSIDF)(250 mg/kg BW/d)、中(Middle-dose soybean insoluble dietary fiber,MSIDF)(500 mg/kg BW/d)、高剂量组(High-dose soybean insoluble dietary fiber,HSIDF)(1 g/kg BW/d),ND组饲喂正常饲料,其余各组饲喂高脂饲料,连续喂养20周。实验结束后统计体质量、肝脏和脂肪湿质量,制作肝脏组织病理切片,测定血清及肝脏脂质水平,实时荧光定量聚合酶链式反应测定小鼠肝脏中脂代谢相关基因表达水平。结果:与HFD组比,SIDF各剂量组可显著减缓小鼠体重增加,降低其血清和肝脏中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)水平(P<0.05),并且HSIDF组效果优于LSIDF、MSIDF组;小鼠肝脏指数(P<0.05)和脂肪系数(P<0.001)显著降低,其中MSIDF和HSIDF组小鼠腹部脂肪(P<0.001)和肾周脂肪重量(P<0.001)显著减少;HSIDF组显著下调小鼠肝脏中脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)、二酰甘油酰基转移酶1(Diacylglycerol acyltransferase-1,DGAT1)、二酰甘油酰基转移酶2(Diacylglycerol acyltransferase-2,DGAT2)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearyl-coenzyme A dehydrogenase-1,SCD1)基因表达水平(P<0.05),同时上调过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferators-activated receptor-α,PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1a(Carnitine palmtoyl transferase-1a,CPT1a)基因表达水平(P<0.05)。结论:IDFS对HFD诱导小鼠肥胖具有预防作用,可能与减少脂质合成,加快脂肪酸氧化有关,其可作为一种潜在的膳食补充剂。

• 葡萄果皮提取物对砷致雄性小鼠生殖毒性的缓解作用

  闫志鹏, 高俊宇, 王瑞廷, 仪慧兰

  为探究玫瑰香葡萄果皮提取物(Grape skin extracts,GSE)对砷致雄性小鼠生殖毒性的影响,本文选昆明种纯系雄性小鼠,通过饮水摄入10 mg/L砷诱发小鼠生殖毒性,以4.5 mg/kg·BW的玫瑰香GSE灌胃干预砷毒性过程。60 d后检测发现,砷染毒组小鼠睾丸系数显著下降(P<0.05),睾丸组织结构出现病理性改变,精子质量和数量显著降低(P<0.05),睾丸组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量显著下降(P<0.05)、H2O2和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)浓度显著增高(P<0.05);与砷染毒组相比,GSE干预组小鼠睾丸系数升高,睾丸组织结构损伤减轻,精子总数显著升高、畸形率显著下降(P<0.05),睾丸组织SOD活性和还原型GSH含量显著升高、H2O2和MDA浓度显著降低(P<0.05)。结果表明,玫瑰香葡萄果皮提取物能缓解砷的雄性生殖毒性,提高小鼠睾丸组织的抗氧化能力,对雄性生殖功能有一定的保护作用。

• 老年人肌肉衰减情况及肉类饮食对其影响的研究

  刘磊, 王鹏, 吕万勇, 李震, 牛丰南, 张晓倩, 祁悦, 路彤, 徐幸莲, 吕艳春

  将60~69岁、70~79岁、≥80岁三个年龄阶段的老年人分为肌肉衰减组、正常组,调查分析了老年人肌肉衰减与肉类饮食等影响因素的关系,揭示肉类饮食、运动状况和老年人肌肉衰减的关系,从食品摄入角度为干预老年人肌肉衰减提供依据。结果表明:从总体上看,与正常组比较发现,肌肉衰减组老年人在性别、BMI(身体质量指数)上差异极显著(P<0.01);组内比较发现,肌肉衰减组三个年龄段老年人随年龄增长其肌肉衰减程度呈上升趋势,SMI(骨骼肌质量指数)下降;膳食状况与运动状况分析发现,肌肉衰减组三个年龄段中部分年龄段老年人在肉类及其蛋白摄入量、畜禽类及其蛋白摄入量、运动量分类上与正常组老年人有显著差异(P<0.05),并且其肌肉衰减率随着肉类及其蛋白摄入量、畜禽类及其蛋白摄入量、运动量分类值的增加而呈递减趋势(P<0.05);肌肉衰减与肉类及其蛋白摄入量有关(β=-2.633、P<0.05;β=-2.216、P<0.05),肉类及其蛋白摄入量为老年人肌肉衰减的保护因素(OR<1);主成分分析发现肉类、抗阻运动量的排序(2、3)和肉类蛋白、抗阻运动量(2、1)排序均靠前,SMI与肉类及其蛋白摄入量、畜禽肉及其蛋白摄入量有较强的相关性,指标之间距离较近。结论:老年人肌肉衰减受年龄、性别、BMI、肉类饮食、运动状况等因素影响,适当增加老年人肉类摄入量(特别是畜禽肉)、抗阻运动量,有助于改善老年人的肌肉衰减。

• 马齿苋多糖对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

  黄小强, 丁辉, 刘顺和, 黄涛, 贾安

  目的:探讨马齿苋多糖对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:采用CCl4建立小鼠急性肝损伤模型。随机将60只小鼠分成正常组、模型组、联苯双酯组(200 mg/kg·d)、马齿苋多糖低、中、高剂量组(1.5、3、6 g/kg/d),连续给药7 d后,除正常组小鼠外,其他各组小鼠腹腔注射0.2%CCl4花生油10 mL/kg;采用ELISA法检测血清中AST、ALT和ALP含量及肝组织匀浆液中MDA、SOD、GSH和GSH-Px活性,HE染色观察肝组织病理学变化,Western Blot检测肝脏组织细胞核内Nrf-2和HO-1蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,马齿苋多糖低剂量组能够显著性降低血清中ALP含量(P<0.05),同时显著性升高肝组织匀浆液SOD水平及Nrf-2蛋白表达水平(P<0.05);马齿苋多糖中剂量组能够显著性降低肝脏指数、血清中AST、ALT含量及肝组织匀浆液中MDA水平(P<0.05),同时显著性升高肝匀浆液中GSH、GSH-Px水平(P<0.05),极显著性降低血清中ALP含量和升高肝组织匀浆液中SOD水平及Nrf-2和HO-1蛋白表达(P<0.01);马齿苋多糖高剂量组能够显著性降低肝脏指数和血清中AST含量(P<0.05),同时显著性升高肝组织匀浆液中GSH和GSH-Px水平(P<0.05),极显著性降低血清中AST、ALP、MDA含量(P<0.01),同时极显著性升高肝组织匀浆液中SOD水平及Nrf-2和HO-1蛋白表达水平(P<0.01);另外,肝组织病理学观察结果表明,马齿苋多糖可以减轻CCl4对肝脏的病理损伤。结论:马齿苋多糖对CCl4诱导的肝损伤有一定的保护作用,其机制与激活Nrf-2/HO-1信号通路有关。

• 异鼠李素调控AKT-FOXO1通路改善胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢作用机制

  包桥桥, 李梦茹, 黄榕, 陈金娇, 刘洪章, 刘树英

  目的:研究异鼠李素通过AKT-FOXO1信号通路改善Hepg2细胞胰岛素抵抗机制。方法:使用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法筛选异鼠李素安全剂量;通过高浓度胰岛素处理诱导Hepg2细胞胰岛素抵抗(IR)模型;使用葡萄糖氧化酶法测得培养基中葡萄糖含量,衡量异鼠李素对胰岛素抵抗Hepg2细胞葡萄糖代谢水平影响;通过Western blot 检测细胞中AKT(蛋白激酶B),p-AKT(磷酸化的蛋白激酶B),FOXO1(叉头转录因子O亚家族1),p-FOXO1(磷酸化的叉头转录因子亚家族1),G6pase(六磷酸葡萄糖酶),PEPCK(磷酸烯醇式丙酮酸激酶)这六个蛋白表达水平的变化。结果:异鼠李素对Hepg2细胞的安全剂量为1~3.8 μg/mL;与模型组相比,低浓度异鼠李素显著的增加了胰岛素抵抗Hepg2葡萄糖消耗量(P<0.05),显著促进了胰岛素抵抗Hepg2细胞的AKT、FOXO1蛋白磷酸化(P<0.05),从而显著抑制了G6pase和PEPCK的蛋白表达(P<0.05),其作用效果与二甲双胍相当。结论:异鼠李素可有效改善胰岛素抵抗Hepg2细胞,并通过调节AKT-FOXO1信号通路达到这一作用效果。

• 辐照红景天乙醇提取物的抗氧化作用及美白作用研究

  孙熙浛, 齐欣, 崔承弼

  目的:探讨60Co-γ射线辐照处理对红景天乙醇提取物抗氧化及美白作用的影响。方法:本试验所用红景天经不同剂量(5、10、20、30 kGy)的60Co-γ射线辐照处理后,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、2,2'-联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基清除率及铁离子还原能力(FRAP)、酪氨酸酶抑制实验、小鼠B16黑色素瘤细胞实验,评价辐照红景天提取物的抗氧化活性及美白活性。结果:与未辐照组相比,辐照组红景天提取物的抗氧化活性及美白活性均增加,其中20 kGy辐照组红景天提取物效果最佳,清除DPPH自由基的IC50值为3.75 μg/mL、清除ABTS自由基的IC50值为44.88 μg/mL、铁离子还原能力FRAP值为(1.90±0.05) mmol/mg、抑制酪氨酸酶的IC50值为244.10 μg/mL、能够有效降低小鼠黑色素瘤细胞中黑色素的合成,并在浓度为0.50%以下时无细胞毒性。结论:20 kGy的60Co-γ射线辐照处理红景天乙醇提取物的抗氧化活性最强,并具有良好的美白功效。

• 细菌纤维素生物合成调控及在食品领域的应用研究进展

  毕继才, 刘四新, 李从发

  细菌纤维素具有低能量、高机械强度、高持水性、低固形物含量、高胶体强度、超细纤维网状结构和良好的口感等优良的食品特性,现已被广泛应用于食品工业领域。本文综述了细菌纤维素的生物合成途径,生物合成调控方式、分泌、组装和结晶过程以及其在食品中作为原料、食品添加剂和包装材料应用的研究进展。

• 对虾加工下脚料的综合提取技术研究进展

  李雨霖, 余炼, 倪婕, 姜毅, 江虹锐, 刘小玲

  随着我国对虾加工行业的迅速发展,产生的加工下脚料也急剧增多,主要包括虾头、虾壳和虾尾,这些下脚料中有很大一部分未被利用导致了资源浪费。工厂一般采用化学法等较简易的方法提取甲壳素、蛋白质、虾青素和虾油,得率低、纯度不高、综合利用率较差,且由于使用大量化学试剂也易造成环境污染。近期的研究发现了超临界CO2萃取、离子液体等新的提取工艺对虾加工下脚料中营养物质的方法,不仅更环保,还能提高得率和纯度以及避免活性物质的破坏和损失。本文针对对虾加工下脚料中营养成分的提取方法进行了综述,比较并分析了化学法、酶法等传统提取技术与微生物发酵法、离子液体法、超临界及亚临界等新的工艺技术的特点,并对其综合提取技术进行了初步探讨,以期为进一步高效开发利用对虾的加工下脚料资源提供一定借鉴。

• 红枣多糖提取、分离纯化及生物活性研究进展

  冀晓龙, 尹明松, 侯春彦, 刘延奇

  红枣作为我国传统的药食同源的天然保健果品,已有近四千多年的栽植和食用历史。红枣多糖是一种复合杂多糖,现代药理学研究表明多糖是红枣果中主要的功能活性成分之一,具有抗氧化、抗肿瘤、免疫保肝及调节肠道菌群等功能。本文系统地综述了国内外近年来关于红枣多糖提取、分离纯化、结构特征及生物活性的研究进展,以期为提高红枣多糖的利用以及为进一步深入研究红枣多糖构效关系提供理论依据。

• 乳蛋白中乳清蛋白与酪蛋白组成、特性及应用的研究进展

  刘永峰, 张薇, 刘婷婷, 杨雨菁, 娄岚, 申倩

  乳清蛋白和酪蛋白是乳蛋白的主要组成成分,具有很高的营养价值。本文从乳中的乳清蛋白与酪蛋白出发,阐述了牛、羊等乳中乳清蛋白和酪蛋白的组成,并分别分析了乳清蛋白和酪蛋白的功能及其相关应用,综述了有关乳清蛋白和酪蛋白的新产品开发及综合利用,以期对乳中蛋白营养价值综合利用提供相应依据,为乳业相关企业及相关专业研究人员提供参考。

• 小檗碱对肠道菌群作用的研究进展

  张秀娟, 马骏池, 赵晋彤, 高世勇

  肠道菌群作为一个微生态系统,其平衡与否与机体的健康状况密切相关。已有研究证实黄连的主要成分小檗碱可以通过调节肠道菌群微生物的结构、种类、丰度及产生活性代谢产物,对肠道微生态失衡所致的肠道感染性疾病等起到预防和治疗的作用。本文对目前研究发现的小檗碱对肠道菌群的作用和作用机制做一综述,为日后小檗碱新型药物作用及膳食补充剂产品的开发提供参考资料。