食品工业科技

作者：杨加亮, 田云恒, 马爱民

关键词：虎奶菇,锰超氧化物歧化酶,酶活,同源克隆,融合引物与巢式PCR,

以虎奶菇菌丝为材料,提取、鉴定了虎奶菇锰超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超声、硫酸铵沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD;WST-8 法测定虎奶菇 Mn-SOD 酶活力;H2O2 鉴定虎奶菇 SOD 的类型;用同源克隆、cDNA 末端快速扩增技术和融合引物与巢式 PCR 等方法从虎奶菇中克隆锰超氧化物歧化酶基因。结果表明,虎奶菇 Mn-SOD 酶活力为 1.66 个酶活力单位。酶经过 H2O2处理后仍然有活性,与未处理无明显差异,表明虎奶菇中 SOD 主要是 Mn-SOD。克隆获得了虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全长1025 bp,开放阅读框全长为663 bp,编码220个氨基酸。序列分析与系统进化树表明,PtMn-SOD与属于侧耳属的糙皮侧耳(登录号:MH645359.1)关系较近。预测该蛋白质分子量为 24.54 kDa,蛋白等电点为 7.86。PtMn-SOD 蛋白定位于线粒体,在线粒体中发挥功效。

来源：2020年第15期

《食品工业科技》期刊编辑部

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