食品工业科技

作者：张秀娟, 于海威, 刘栋琦, 赵晋彤, 熊向华

关键词：SrtA,密码子优化,酶连接法,A型肉毒毒素,

按大肠杆菌偏好优化密码子并合成高活性突变型srtA基因，构建Trx蛋白共表达载体pTIG-srtA，转入大肠杆菌BL21（DE3）后低温诱导表达，通过Ni2+柱亲和层析纯化SrtA蛋白，连接LHN-LPETG和G-HC蛋白检测SrtA蛋白活性。菌液PCR鉴定和测定序列比对结果显示，构建pTIG-srtA载体成功；SDS-PAGE及Western Blot分析结果显示，在大肠杆菌中实现了SrtA蛋白的可溶性高表达，Ni2+柱亲和层析后得到纯度大于95%的SrtA蛋白，LHN-LPETG和G-HC蛋白成功连接表明，原核系统表达纯化的SrtA蛋白具有良好的转肽酶活性。

来源：2021年第10期

《食品工业科技》期刊编辑部

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