食品工业科技

作者：韩萌萌, 盖金明, 姜庆丰, 张会, 李杰

关键词：果胶甲酯酶,黑曲霉,背景蛋白,分泌表达,

为获得一株高产高纯度的果胶甲酯酶的黑曲霉工程菌，提高果胶甲酯酶的产量，从果胶酶生产菌种中克隆了果胶甲酯酶基因pmeA，通过同源重组的原理，冻融法转化农杆菌、农杆菌介导法转化黑曲霉方法，成功构建了分泌表达果胶甲酯酶的纯合重组菌株TH-2（glaA::pmeA）。基本发酵培养基中发酵第9 d上清中最高酶活达到467.77 U/mL。进一步敲除重组菌株TH-2（glaA::pmeA）中背景蛋白酸稳定的α-淀粉酶的编码基因asaA，获得纯合重组菌株TH-2（glaA::pmeA?pyrG?asaA）。该菌株在添加1%的硫酸铵的发酵培养基中培养7 d后，发酵液上清中主要的背景蛋白均消失。但是与纯合重组菌株TH-2（glaA::pmeA）相比，果胶甲酯酶表达量有所下降，最高酶活为255.40 U/mL。重组果胶甲酯酶的最适作用温度为50 ℃，适合的温度范围是40~80 ℃，在80 ℃下仍能维持其酶活性的70%以上，适合的pH范围是3.0~5.0，最适pH为4.0。最终获得了一株温度和pH作用范围较宽的高产高纯度果胶甲酯酶的黑曲霉工程菌。

来源：2021年第20期

《食品工业科技》期刊编辑部

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