食品工业科技

作者：袁林, 曾静, 郭建军, 魏国汶

关键词：粪肠球菌,内源性质粒,θ型复制,穿梭载体,大肠杆菌,

为了对粪肠球菌EXW27的内源性质粒pXW进行DNA序列的测定和分析，并基于其最小复制子构建大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体。本研究从具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27中分离得到了内源性质粒pXW，对其进行了DNA序列的测定及分析，然后利用质粒pXW的复制子构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体，并研究大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体的宿主范围、转化效率和稳定性。结果表明该质粒大小为8617 bp，GC含量为33.29%，包含8个ORF，推定为θ型复制质粒。质粒pXW在粪肠球菌EXW27中拷贝数最高可达32.09±0.93，表明质粒pXW属于高拷贝数质粒。本研究确定了质粒pXW的最小复制子，并基于该复制子构建了大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体pXWM1。该穿梭载体具有较宽的宿主范围，可成功转化至不同类型乳酸菌，转化效率介于1.96×102~8.96×104 CFU/μg （质粒DNA）之间，质粒丢失率介于28.54%~54.17%之间。本研究成功构建了一个具有宽宿主范围、高转化效率以及高稳定性的大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体，为乳酸菌基因操作提供了新工具。

来源：2021年第23期

《食品工业科技》期刊编辑部

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