食品工业科技

作者：何圣发, 龙彩云, 王娇, 熊梦, 赵江强, 燕燕, 董亚萍, 李欣, 陈红兵

关键词：牛乳过敏原,<i>α</i>_S1-酪蛋白,纯化,鉴定,多克隆抗体,

目的：从牛乳酪蛋白中纯化获得αS1-酪蛋白并对其进行综合鉴定，以及制备特异性识别αS1-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法：采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对αS1-酪蛋白进行分离纯化，利用酪蛋白的理化性质（等电点和含量）、免疫学技术和质谱技术对纯化的αS1-酪蛋白进行综合鉴定，然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的αS1-酪蛋白，最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并分析其特异性。结果：在4种酪蛋白中，αS1-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大，在电泳图中的位置最高，最终获得纯度高达94.26%的αS1-酪蛋白，得率为27.19%。免疫5次后，两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万，抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应（<0.25%）外，与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应，表明特异性高。结论：本研究制备了高纯度的αS1-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体，为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路，为αS1-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础。

来源：2022年第15期

《食品工业科技》期刊编辑部

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