食品工业科技

作者：李秋凤, 陈静, 赵婧邑, 韦欣, 王志琦, 刘继栋

关键词：D-阿洛酮糖3-差向异构酶,大肠杆菌,冷休克,可溶性表达,酶学性质,发酵优化,

将来源于Clostridium bolteae ATCCBAA-613的DAEase基因序列经密码子优化合成，以pCold TF为表达载体，冷休克启动子CspA低温诱导DAEase基因在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21 （DE3）中表达，得到高效可溶性的重组Cb-DAEase并利用镍柱亲和层析分离纯化。结果表明，Cb-DAEase最适pH和温度为7.0和55 ℃，Co2+能够显著（P<0.05）增强酶活力。对培养条件进行优化得到，在7 g/L甘油、10 g/L酵母膏、1%接种量、0.25 mmol/LIPTG、诱导前培养5 h的条件下，Cb-DAEase活力达到（10.11±0.02）U/g，比优化前(1.38±0.01) U/g提高了7.33倍；以120 g/L的D-果糖为底物全细胞催化0.5 h后，D-阿洛酮糖产量为（11.47±0.04）g/L，比优化前（1.03±0.02）g/L提高了11.14倍。基于冷休克表达策略构建的重组菌经发酵优化后Cb-DAEase活力显著（P<0.05）提高，为高效制备D-阿洛酮糖提供了理论支持。

来源：2022年第22期

《食品工业科技》期刊编辑部

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