食品工业科技

作者：艾正文

关键词：<i>β</i>-酪蛋白,大肠杆菌,原核生物表达,<i>CSN2-A1</i>,<i>CSN2-A2</i>,

牛乳中β-酪蛋白含有多种变异体，其中A1β-酪蛋白（A1）和A2β-酪蛋白（A2）是其最常见的2种变异体。由于A1和A2蛋白在氨基酸序列上仅存在个别氨基酸的差异，因此通过常规的分离、纯化手段较难以实现纯度较高的A1和A2蛋白的制备。本研究利用分子生物学手段，分别构建含有CSN2-A1和CSN2-A2目的基因的重组质粒载体pET28a（+）-CSN2-A1和pET28a（+）-CSN2-A2。将构建的重组表达载体导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达和纯化。结果表明，在0.2 mmol/L IPTG，37 ℃下诱导表达4 h可获得大量蛋白，但通过SDS-PAGE电泳显示目的蛋白以包涵体形式表达，存在于细胞破碎后的沉淀中。通过洗涤、溶解、镍柱亲和色谱纯化、复性以及鉴定等步骤最终可获得纯度大于90%（PAGE）的A1和A2重组蛋白，从而为制备A1和A2蛋白提供新的途径。

来源：2023年第16期

《食品工业科技》期刊编辑部

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