食品工业科技

作者：焦雪, 董羽织, 王靖雯, 吕晨泽, 方结红, 蒋晗

关键词：多黏菌素耐药基因<i>mcr-1</i>,重组酶聚合酶扩增技术,胶体金侧向流试纸条,快速检测,可视化,定量,

目的：建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法，为其基层检测的展开提供依据和便利。方法：利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术（Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick，RPA-LFD），辅以手持式胶体金读数仪；根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物，通过对反应条件和体系的优化，以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验，成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果：在引物浓度400 nmol/L，引物比例1:1时，该方法最佳反应条件为Mg2+浓度14.0 mmol/L，反应温度37 ℃，反应时间20 min；灵敏度好，标准曲线方程为y=0.117x+0.051，定量限为101~108 copies/μL，检出限为101 copies/μL，比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利用建立的RPA-LFD法对猪肉样品、鸡肉样品、生猪养殖场环境样品、肉鸡养殖场环境样品、大肠杆菌分离株和弯曲肠杆菌分离株各15份中多黏菌素耐药基因mcr-1携带情况进行分析；RPA-LFD法与常规PCR法阳性样本检出率一致，共检出9份mcr-1基因阳性样品。RPA-LFD定量分析显示，阳性样品中mcr-1基因浓度在4.5×102~8.6×104 copies/?L之间。结论：本研究建立的细菌多黏菌素耐药基因 mcr-1的RPA-LFD检测法特异性强、灵敏性高、操作简单，可广泛应用于基层检验。

来源：2023年第18期

《食品工业科技》期刊编辑部

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