食品工业科技

作者：牛庭莉, 田媛, 张利国, 张树权, 李志江, 康悦, 迟建, 高宝昌, 戴凌燕

关键词：大麻,大麻二酚酸合成酶,大麻二酚,异源表达,条件优化,

为了实现大麻二酚酸合成酶（CBDAS）的微生物底盘高效表达，为体外合成大麻二酚（CBD）提供重组酶。首先从高CBD含量大麻叶片中克隆CBDAS基因，利用生物信息学方法分析其蛋白的基本理化性质，构建重组质粒pPIC9K-CBDAS后转化毕赤酵母菌，筛选重组蛋白CBDAS高表达的培养条件，并分析CBDAS的催化活性。结果表明，构建的pPIC9K-CBDAS融合蛋白表达系统能在毕赤酵母中表达；在甲醇添加量为1%、培养基pH6.0和培养48 h的诱导条件下表达量最大；重组酶CBDAS催化底物大麻萜酚酸（CBGA）反应4 h后大麻二酚酸（CBDA）含量显著增加（P<0.05），在8 h后CBD含量显著增加（P<0.05），在12 h时合成CBDA和CBD量达到最大值；CBDAS在大麻叶片大麻萜酚酸（CBGA）粗提液和CBGA标品中反应12 h后分别生成CBDA 60.64和20.12 ng/mL，CBD 128.01和207.87 ng/mL，具有较强的催化活性。通过酵母异源表达实现了大麻CBDAS的重组表达，为经济高效地合成CBDA和CBD提供活性酶。

来源：2023年第20期

《食品工业科技》期刊编辑部

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