食品工业科技

作者：王磊, 刘小草, 董雨, 王雪婷, 柴徵微, 李吉, 丁爱军, 张维明, 曾韦锟

关键词：甲型副伤寒沙门氏菌,原核表达,HmpA蛋白,蛋白纯化,生物信息学分析,

目的：原核表达甲型副伤寒沙门氏菌（Salmonella paratyphi A）HmpA蛋白，并对其进行生物信息学分析，为研究副甲菌HmpA蛋白对于宿主体内一氧化氮（NO）信号通路的影响提供理论参考。方法：PCR扩增hmpA基因，亚克隆至T载体后，再构建pNdeI-hmpA表达载体，转化BL21（DE3），经IPTG诱导后，SDS-PAGE检测蛋白表达形式，利用Histrap预装柱亲和纯化HmpA蛋白，并用Western blot鉴定，生物信息学多方法分析HmpA蛋白特征。结果：成功构建了原核表达载体pNdeI-hmpA，低温诱导时，HmpA蛋白以包涵体和可溶表达形式并存；纯化后的HmpA蛋白可被His标签抗体检测。生物信息学分析提示HmpA蛋白为亲水性蛋白；无跨膜结构域、无信号肽；蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成，三级结构模型类似环状；蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域，属于PRK13289超级家族；共有32个磷酸化位点；与沙门氏菌多个降解硝酸盐和杀伤性NO的蛋白酶或转录因子存在关联。结论：本研究成功利用基因工程技术获得了甲型副伤寒沙门氏菌HmpA蛋白，并通过生物信息学方法预测了其部分生物学特征，为后续揭示甲型副伤寒沙门氏HmpA蛋白对于宿主体内的一氧化氮信号通路的影响提供理论支持。

来源：2023年第24期

《食品工业科技》期刊编辑部

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