食品工业科技

作者：张雪, 马丽侠, 叶德萍, 易艳, 姜展樾, 周李华, 谢贞建

关键词：致泻大肠埃希氏菌,毒力因子,微滴式数字PCR,质粒DNA标准物质候选物,

传统的致泻大肠埃希氏菌检验方法耗时较长，为缩短检测时间，构建了含致泻大肠埃希氏菌bfpB、ipaH、stp特征基因的质粒DNA标准物质候选物，针对bfpB、ipaH、stp基因建立一套可实现快速检测的微滴式数字PCR系统。用微滴数字PCR（Droplet Digital PCR，ddPCR）进行引物探针浓度和退火温度等体系优化后，以梯度稀释的质粒DNA为模板评估方法的线性相关性和精密度，添加非目标基因invE、sth为模板验证方法特异性，并将构建的ddPCR方法用于即食果蔬制品的实际检测。结果表明，bfpB、ipaH、stp质粒DNA最优引物终浓度均为400 nmol/L，最优探针终浓度分别为200、100、200 nmol/L；bfpB、ipaH、stp质粒DNA最优退火温度分别为60、58、58 ℃；特征基因bfpB、ipaH、stp分别在8.87~38700.00、3.33~36533.33、6.57~61833.33 copies/μL浓度范围呈线性相关，浓度梯度的线性相关系数r值均大于0.99；bfpB、ipaH、stp基因的定量限分别为15.33、7.97、15.00 copies/μL，检出限分别为8.87、3.33、6.57 copies/μL；方法精密度小于5%，特异性良好；实际样品检测结果显示，未加标样品未检出，而加标样品及阳性对照均可检出，ddPCR方法检测结果与国标方法检测结果一致。建立的方法可大大缩短致泻大肠埃希氏菌的检测时间，为食品中致泻大肠埃希氏菌的快速检测提供技术参考。

来源：2025年第21期

《食品工业科技》期刊编辑部

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